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細胞培養(yǎng)基技術(shù)說明

2024-10-14 [770]

       在醫(yī)學遺傳學研究中應用廣泛的是外周血淋巴細胞、皮膚或纖維細胞和各種能在體外長期生長的細胞系。外周血淋巴細胞培養(yǎng)基具有時間短、技術(shù)簡便、可重復取材等優(yōu)點,它在臨床染色體分析中使用廣泛。體外培養(yǎng)細胞培養(yǎng)基株可在培養(yǎng)過程中發(fā)生自發(fā)的或在外界作用下的轉(zhuǎn)化,成為細胞系,也可直接建成細胞系,細胞培養(yǎng)基系能在體外無取制的傳代和生長。細胞系通常具有非整倍體細胞和各個細胞的核型不相同特征。但細胞克隆的細胞系其這一特征可以不明顯。

細胞在體外培養(yǎng)中所需的條件與體內(nèi)細胞基本相同。

1、無污染環(huán)境

       培養(yǎng)環(huán)境無毒和無菌是保證細胞培養(yǎng)基生存的首要條件。當細胞放置于體外培養(yǎng)時,與體內(nèi)相比細胞丟失了對微生物和有毒物的防御能力,一旦被污染或自身代謝物質(zhì)積累等,可導致細胞培養(yǎng)基死亡。因此在進行培養(yǎng)中,保持細胞生存環(huán)境無污染、代謝物及時清除等,是維持細胞生存的基本條件。

2、恒定的溫度

  維持培養(yǎng)細胞培養(yǎng)基旺盛生長,必須有恒定適宜的溫度。人體細胞培養(yǎng)的標準溫度為36.5℃±0.5℃,偏離這一溫度范圍,細胞培養(yǎng)基的正常代謝會受到影響,甚至死亡。培養(yǎng)細胞對低溫的耐受力較對高溫強,溫度上升不超過39℃時,細胞代謝與溫度成正比;人體細胞在39-40℃1小時,即能受到一定損傷,但仍有可能恢復;在40-41℃1小時,細胞會普遍受到損傷,僅小半數(shù)有可能恢復;41-42℃1小時,細胞培養(yǎng)基受到嚴重損傷,大部分細胞培養(yǎng)基死亡,個別細胞仍有恢復可能;當溫度在43℃以上1小時,細胞培養(yǎng)基全部死亡。

3、氣體環(huán)境

  氣體是人體細胞培養(yǎng)基生存必需條件之一,所需氣體主要有氧氣和二氧化碳。氧氣參與三羧酸循環(huán),產(chǎn)生供給細胞生長增殖的能量和合成細胞生長所需用的各種成分。開放培養(yǎng)時一般把細胞置于95%空氣加5%二氧化碳混合氣體環(huán)境中。

  二氧化碳既是細胞培養(yǎng)基代謝產(chǎn)物,也是細胞培養(yǎng)基生長繁殖所需成分,它在細胞培養(yǎng)中的主要作用在于維持培養(yǎng)基的PH值。大多數(shù)細胞的適宜PH為7.2-7.4,偏離這一范圍對細胞培養(yǎng)將產(chǎn)生有害的影響。但細胞耐酸性比耐堿性大一些,在偏酸環(huán)境中更利于細胞生長。有資料顯示,原代羊水細胞培養(yǎng)PH6.8時zui適。

  細胞培養(yǎng)基液PH濃度的調(diào)節(jié)常用的為加NaHCO3的方法,因為NaHCO3可供CO2,但二氧易于逸出,故適用于封閉培養(yǎng),也起緩沖作用,有防止PH迅速變動的特性而用于開放細胞培養(yǎng)技術(shù)中,其zui大優(yōu)點是在開放式培養(yǎng)或細胞觀察時能維持較恒定的PH值。

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